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Universitätsbibliothek Heidelberg
Status: Bibliographieeintrag

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Verfasst von:Medert, Rebekka [VerfasserIn]   i
 Thumberger, Thomas [VerfasserIn]   i
 Tavhelidse-Suck, Tinatini [VerfasserIn]   i
 Hub, Tobias [VerfasserIn]   i
 Kellner, Tanja [VerfasserIn]   i
 Oguchi, Yoko [VerfasserIn]   i
 Dlugosz, Sascha [VerfasserIn]   i
 Zimmermann, Frank [VerfasserIn]   i
 Wittbrodt, Joachim [VerfasserIn]   i
 Freichel, Marc [VerfasserIn]   i
Titel:Efficient single copy integration via homology-directed repair (scHDR) by 5′modification of large DNA donor fragments in mice
Verf.angabe:Rebekka Medert, Thomas Thumberger, Tinatini Tavhelidse-Suck, Tobias Hub, Tanja Kellner, Yoko Oguchi, Sascha Dlugosz, Frank Zimmermann, Joachim Wittbrodt and Marc Freichel
E-Jahr:2023
Jahr:22 February 2023
Umfang:14 S.
Illustrationen:Illustrationen
Fussnoten:Online veröffentlicht: 19. Dezember 2022 ; Gesehen am 26.02.2024
Titel Quelle:Enthalten in: Nucleic acids research
Ort Quelle:Oxford : Oxford Univ. Press, 1974
Band/Heft Quelle:51(2023), 3, Artikel-ID e14, Seite 1-14
ISSN Quelle:1362-4962
Abstract:CRISPR/Cas-based approaches have largely replaced conventional gene targeting strategies. However, homology-directed repair (HDR) in the mouse genome is not very efficient, and precisely inserting longer sequences using HDR remains challenging given that donor constructs preferentially integrate as concatemers. Here, we showed that injecting 5′ biotinylated donor DNA into mouse embryos at the two-cell stage led to efficient single-copy HDR (scHDR) allele generation. Our dedicated genotyping strategy showed that these alleles occurred with frequencies of 19%, 20%, and 26% at three independent gene loci, indicating that scHDR was dramatically increased by 5′ biotinylation. Thus, we suggest that the combination of a 5′ biotinylated donor and diligent analysis of concatemer integration are prerequisites for efficiently and reliably generating conditional alleles or other large fragment knock-ins in the mouse genome.
DOI:doi:10.1093/nar/gkac1150
URL:Bitte beachten Sie: Dies ist ein Bibliographieeintrag. Ein Volltextzugriff für Mitglieder der Universität besteht hier nur, falls für die entsprechende Zeitschrift/den entsprechenden Sammelband ein Abonnement besteht oder es sich um einen OpenAccess-Titel handelt.

Volltext: https://doi.org/10.1093/nar/gkac1150
 DOI: https://doi.org/10.1093/nar/gkac1150
Datenträger:Online-Ressource
Sprache:eng
K10plus-PPN:1881631907
Verknüpfungen:→ Zeitschrift

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